一种高效诱导喜树离体叶片不定芽再生的培养基

    公开(公告)号:CN1250710C

    公开(公告)日:2006-04-12

    申请号:CN200410044119.5

    申请日:2004-12-13

    Abstract: 一种高效诱导喜树离体叶片不定芽再生的培养基,由硝酸铵、硫酸钾、七水硫酸镁、磷酸二氢钾、二水氯化钙、四水硝酸钙、七水硫酸亚铁、乙二胺四乙酸二钠、硼酸、一水硫酸锰、七水硫酸锌、二水钼酸钠、五水硫酸铜、烟酸、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、肌醇组成WPM培养基的基础上还增加了植物激素6-BA(6-苄基氨基腺嘌呤)、IBA(吲哚丁酸)、NAA(萘乙酸)及琼脂与蔗糖。本发明中的培养基使喜树离体叶片愈伤组织诱导率高,愈伤组织不定芽发生频率高,可达70%,而且每片叶片不定芽发生数目多,平均为11个。这种培养基使喜树离体叶片不定芽发生的再生系统具有高频性和可重复性,为喜树次生代谢基因工程打下了良好的基础。

    长春花谷胱甘肽转移酶的基因序列

    公开(公告)号:CN1687422A

    公开(公告)日:2005-10-26

    申请号:CN200510009937.6

    申请日:2005-04-27

    Abstract: 一种长春花谷胱甘肽转移酶(Glutathione S-transferase)的基因序列及其编码产物的氨基酸序列。它涉及一种新的基因序列。其特征在于:该基因全长929bp,在56bp处具有起始密码子ATG,718bp处具有终止密码子TGA,在910bp处具有polyA附加信号。该序列无内含子,具有663bp完整的开放读码框,编码220个氨基酸。所述的核苷酸序列与辣椒(Capsicum chinense)全长基因GST1同源性高达67.7%,以及大戟属植物(Euphorbia esula)全长基因GST同源性高达57.7%。本发明还提供了一种快速得到全长胁迫基因的方法。首先使用适度的干旱处理条件,使植物抗旱基因表达富集;然后通过构建全长的cDNA文库及测序,在最短的时间内得到抗干旱胁迫相关的全长基因。获得的抗旱基因直接构建在真核表达载体pCMV质粒上,可使用t3、t7通用引物进行测序。同时,可通过真核生物表达来直接进行筛选。本发明从植物cDNA中分离出了谷胱甘肽转移酶的全长基因,该基因具有较强的抗氧化功能,在植物逆境胁迫过程中表达增加,起到去除氧自由基的作用。该基因的克隆扩大了植物抗旱研究的基因资源,为运用基因工程技术提高植物抗干旱胁迫及品质改良提供了更加丰富的优良候选基因。

    长春花第三组晚期胚胎丰富蛋白的基因序列

    公开(公告)号:CN1687417A

    公开(公告)日:2005-10-26

    申请号:CN200510009938.0

    申请日:2005-04-27

    Abstract: 一种长春花第三组晚期胚胎丰富蛋白及其编码产物的氨基酸序列。它涉及一种新的基因序列。其特征在于:该基因全长829bp,在127bp处具有起始密码子ATG,618bp处具有终止密码子TGA,在806bp处具有polyA附加信号。该序列无内含子,具有492bp完整的开放读码框,编码163个氨基酸。所述的核苷酸序列与胡萝卜LEADC3的同源性达69%的,与鸡豆晚期胚胎丰富蛋白同源性达51%。它包含6个由11个氨基酸残基构成的基元序列。本发明还提供了一种快速得到全长胁迫基因的方法。首先使用适度的干旱处理条件,使植物抗旱基因表达富集;然后通过构建全长的cDNA文库及测序,在最短的时间内得到抗干旱胁迫相关的全长基因。获得的抗旱基因直接构建在真核表达载体pCMV质粒上,可使用t3、t7通用引物进行测序。同时,可通过真核生物表达来直接进行筛选。本发明从植物cDNA中分离出了第三组晚期胚胎丰富蛋白的全长基因,该基因具有较强的抗旱功能,同时,对植物耐寒、耐盐性方面也起到重要的作用。该基因的克隆扩大了植物抗旱研究的基因资源,为运用基因工程技术提高植物抗干旱胁迫及品质改良提供了更加丰富的优良候选基因。

    一种高效的木豆毛状根培养体系建立方法

    公开(公告)号:CN104017822A

    公开(公告)日:2014-09-03

    申请号:CN201310190956.8

    申请日:2013-05-22

    Abstract: 本发明提供一种利用木豆无菌苗叶片进行外植体转化,建立木豆毛状根培养体系方法。本发明采用叶片为外植体,建立毛状根培养体系:叶片在1/2MS+IBA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L的培养基上预培养两天后进行菌液侵染,菌液浓度OD600为0.6-0.8,侵染5-10min后转入1/2MS+IBA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L培养基上共培养3天,然后转入抑菌培养基1/2MS+IBA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂8g/L+400mg/L羧苄青霉素,约一周左右便可形成毛状根。PCR检测证明外源基因已经转入到木豆毛状根中,转化率为60%。转化后毛状根在无激素培养基上生长速度非常快,一个月能增殖7-8倍。次生代谢产物含量高,芹菜素和染料木素含量分别为0.58mg/g(DW)和1.32mg/g(DW),显著高于实生苗根中含量。本发明提供的培养简单、再生周期短、可持续获得木豆毛状根方法,可用于规模化培养木豆毛状根来提取有价值次生代谢产物,具有很好的应用前景。

    一种测定外生菌根真菌影响土壤胶体表面特征与组成的方法

    公开(公告)号:CN103383335A

    公开(公告)日:2013-11-06

    申请号:CN201310239703.5

    申请日:2013-06-18

    Abstract: 一种测定外生菌根真菌影响土壤胶体表面特征与组成的方法,首先制备真菌菌液和土壤胶体溶液,然后取4ml土壤胶体溶液与10μl真菌菌液反应,做成不同的样品,进行激光粒度仪、原子力显微镜、扫描电镜、X射线衍射、红外光谱、X射线光电子能谱的分析。通过激光粒度仪观察土壤胶体粒径大小及分布的变化,原子力显微镜和扫描电镜观察土壤胶体表面特征的变化,X射线衍射辨认土壤的矿物组成,并分析各矿物质晶粒尺寸和相对结晶度的变化,红外光谱和X射线光电子能谱来研究土壤官能团及有机元素组成的变化。通过以上分析方法探究真菌对土壤胶体表面结构特征、矿物组成和有机组成的影响,旨为揭示真菌影响土壤的深层机理提供技术支持。

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