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公开(公告)号：CN106636177A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201710043801.X
申请日：2017-01-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一个Candida amazonensis的FLP/FRT基因敲除系统，属于基因工程技术领域。本发明将FLP重组酶基因置于严格诱导型启动子SpGAL1p或SpMAL1p下调控，并在FLP表达盒和抗性标记表达盒两端添加同向重复的FRT位点，以PDC为靶基因构建基因敲除盒整合到Candida amazonensis基因组中，后续通过添加诱导剂诱导FLP表达，实现抗性基因的切除。本发明首次实现了Candida amazonensis的无标记基因敲除，并可以用于连续敲除多个基因，为Candida amazonensis的代谢工程改造提供了强有力的技术手段。
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公开(公告)号：CN104099253B
公开(公告)日：2016-07-06
申请号：CN201410329652.X
申请日：2014-07-11
Applicant: 江南大学 , 江苏国信协联能源有限公司
Abstract: 一种基于菌丝球分散技术的柠檬酸黑曲霉种子连续培养方法，包括以下步骤：（1）将黑曲霉孢子液接种至种子培养基，培养制备成熟的种子液；（2）成熟的种子液经过分散器处理，得到分散菌丝种子液；（3）将步骤（2）得到的部分分散菌丝种子液以5~15%接种量转接至发酵培养基发酵，当发酵培养基还原糖浓度低于0.5%时发酵结束；（4）将步骤（2）得到的部分分散菌丝种子液以5~15%接种量接种至种子培养基，培养制备得到下一级成熟的种子液，然后回到步骤（2），即实现黑曲霉种子连续培养。本发明提供的黑曲霉种子连续培养方法，能直接减少黑曲霉孢子繁琐的培养过程，同时可以有效缩短成熟种子培养时间，提高原料利用率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105586366A
公开(公告)日：2016-05-18
申请号：CN201610135591.2
申请日：2016-03-10
Applicant: 江南大学 , 江苏国信协联能源有限公司
Abstract: 本发明公开一种基于控制菌丝体结构改善柠檬酸发酵性能的方法，包括：将培养成熟的黑曲霉孢子配制成孢子悬液，接种至种子培养基进行种子培养；在种子培养过程中，提高搅拌转速扰动孢子萌发与菌丝缠绕过程，获得成熟种子液；将上述成熟种子液接种至发酵培养基进行发酵培养，结束发酵；所述提高搅拌速度扰动的工艺是在所述种子培养进行6~20h启动的。本发明可获得有利于柠檬酸合成的特定结构菌丝体形态，改善发酵性能，提高柠檬酸产量，同时可降低孢子使用量，降低生产成本，简单易行，具有重要的经济效益和广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN104593407A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201510005584.6
申请日：2015-01-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及树干毕赤酵母基因表达系统及其构建与应用，包括一种新型表达载体，其为环状，从5’-3’依次可操作性地连接有以下元件：pMD19-Tsimple质粒骨架、rDNA同源重组序列、外源基因表达盒和筛选标记基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次包括启动子、外源基因插入酶切位点以及转录终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、抗生素抗性基因、转录终止子。所述能够利用木糖的酵母为树干毕赤酵母。本发明的表达载体可实现在树干毕赤酵母中的整合型稳定表达，对树干毕赤酵母的基础理论研究及产品开发具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN104561081A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201510005585.0
申请日：2015-01-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一株能够利用木糖的酵母Candida amazonensis的表达系统，包括一种新型表达载体，其为环状，从5’-3’依次可操作性地连接有以下元件：pMD19-Tsimple质粒骨架、rDNA同源重组序列、外源基因表达盒和筛选标记基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次包括启动子、外源基因插入酶切位点以及转录终止子；所述筛选标记基因表达盒包括启动子、抗生素抗性基因、转录终止子。所述能够利用木糖的酵母为Candida amazonensis。本发明的表达载体可实现在Candida amazonensis中的整合型稳定表达，对木糖利用酵母Candida amazonensis的基础理论研究及产品开发具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN104087624A
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201410329786.1
申请日：2014-07-11
Applicant: 江南大学 , 宜兴协联生物化学有限公司
Abstract: 一种黑曲霉连续发酵生产柠檬酸的方法，包括以下步骤：（1）黑曲霉经过逐级扩大培养，获得成熟的孢子；（2）孢子液接种至种子培养基，培养成为成熟的种子液；（3）成熟的种子液转接至发酵培养基F1；（4）发酵培养后，分割发酵液为两部分；其中一部分发酵液继续发酵完毕，获得柠檬酸；（5）分割出的另一部分发酵液经分散器分散处理，获得分散菌丝的发酵液；（6）将分散菌丝发酵液接入发酵培养基F2；发酵培养后，回到步骤（4），如此重复实现连续发酵。本发明显著降低生产成本与运行成本，显著缩短生产周期，提高生产效率；同时提高设备利用率，降低劳动强度，过程简便易操作，可以广泛应用于柠檬酸的生产。
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公开(公告)号：CN102199553B
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201110116783.6
申请日：2011-05-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 一株耐酸酵母及其代谢工程构建产L-乳酸重组菌的方法，属于基因工程技术领域。本发明筛选分离得到一株能在pH2.5条件下生长且不利用乳酸的酵母，鉴定为木兰假丝酵母C4(CandidamagnoliaeC4)，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCCNO：M2010362；将来源于米根霉As3.819的乳酸脱氢酶编码基因(ldhA)插入含有G418抗性基因的酵母穿梭载体，构建了重组质粒pYX212-kanMX-ldhA；电转化入木兰假丝酵母C4中，得到一株具有产L-乳酸能力的重组菌株木兰假丝酵母C42，其产乳酸量达到42g/L。本发明所构建的木兰假丝酵母C42具有耐乳酸的明显优势，在生产中可以大幅度降低中和剂CaCO3的用量，减少环境污染。
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