公开(公告)号：CN108949824A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810813577.2

申请日：2018-07-23

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  袁梦珂 ,  韩静 ,  吴腾 ,  高元鹏 ,  韦永可

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/66

CPC classification number: C12N15/85 ,  C07K14/35 ,  C12N15/65 ,  C12N15/907 ,  C12N2510/00 ,  C12Q1/66

Abstract: 本发明公开了一种利用Cas9切割核酸酶基于HMEJ的方法介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法，本发明通过电穿孔的方法分别将HMEJ策略的供体载体与HR策略的供体载体和针对打靶位点的CRISPR/Cas9表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，供体载体中MSR1启动子可以使Ipr1实现在专职吞噬性细胞中的特异性表达，嘌呤霉素药物筛选后，经过PCR鉴定获得打靶的阳性克隆细胞。HMEJ策略获得阳性克隆细胞的效率高于传统的HR策略。以HMEJ策略获得的转基因阳性克隆细胞为核供体，获得转基因克隆胚胎，进一步将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫内，最终获得成活的Ipr1定点插入转基因克隆牛。