-
公开(公告)号：CN1865436B
公开(公告)日：2010-05-12
申请号：CN200610041977.3
申请日：2006-03-27
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种分离纯化皮肤表皮干细胞的方法，在皮肤组织块培养过程中采用自行设计的培养基能有效抑制成纤维细胞的生长，从组织块四周生长出均一的上皮样细胞，诱发表皮干细胞迁移出原来的微环境，在新生成的上皮样细胞层上重新聚集生长。这类克隆性生长的细胞与其共生的上皮样细胞有明显形态学上的差别。借助解剖镜和玻璃针就能将其挑选出来，进行单独扩增培养。对所获得细胞进行当前同行公认的表皮干细胞分子标志的检测：CK19，β1-integrin，P63，α6-integrin均为阳性，即证明所分选的是纯化的表皮干细胞。本发明克服了传统酶消化法的缺点，直接利用干细胞的生物学行为获得纯化的表皮干细胞，可用于人类和哺乳动物表皮干细胞的分离纯化。
-
公开(公告)号：CN1242058C
公开(公告)日：2006-02-15
申请号：CN200410026031.0
申请日：2004-04-09
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种用表皮干细胞构建的人工角膜上皮植片的制备及用于移植修复因角膜缘干细胞缺损而失明的眼表的用途。表皮干细胞构建的人工角膜上皮植片，无菌采取成人颈部或关中奶山羊耳缘皮肤，用组块培养法和克隆筛选法分离纯化表皮干细胞，用无血清培养基进行扩增，并对所获干细胞进行CK19、P63、integrin-β1等表皮干细胞的标志蛋白免疫组织化学检测；再将纯化的表皮干细胞接种在去上皮细胞的人类羊膜支架上，无血清培养基培养，培养21天后，表皮干细胞在羊膜上分化形成复层，成为表皮干细胞羊膜植片；经透射电镜观察，表皮干细胞分为5-6层细胞；具有正常角膜上皮相似结构。以羊为实验动物模型进行自体或同种异体表皮干细胞羊膜植片移植均取得良好效果。
-
公开(公告)号：CN1563366A
公开(公告)日：2005-01-12
申请号：CN200410026031.0
申请日：2004-04-09
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种用表皮干细胞构建的人工角膜上皮植片的制备及用于移植修复因角膜缘干细胞缺损而失明的眼表的用途。表皮干细胞构建的人工角膜上皮植片，无菌采取成人颈部或关中奶山羊耳缘皮肤，用组块培养法和克隆筛选法分离纯化表皮干细胞，用无血清培养基进行扩增，并对所获干细胞进行CK19、P63、integrin－β1等表皮干细胞的标志蛋白免疫组织化学检测；再将纯化的表皮干细胞接种在去上皮细胞的人类羊膜支架上，无血清培养基培养，培养21天后，表皮干细胞在羊膜上分化形成复层，成为表皮干细胞羊膜植片；经透射电镜观察，表皮干细胞分为5－6层细胞；具有正常角膜上皮相似结构。以羊为实验动物模型进行自体或同种异体表皮干细胞羊膜植片移植均取得良好效果。
-
公开(公告)号：CN1232635C
公开(公告)日：2005-12-21
申请号：CN200410025938.5
申请日：2004-03-12
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明公开了关中奶山羊表皮干细胞无血清培养基的制备方法，包括成纤维细胞条件培养基和IGF-1、EGF、GSFCM适宜添加浓度的筛选，最后确定培养基配方为：F12+1～1.2%BSA+20～25%GSFCM+20～25ng/mlEGF+5ug/ml insulin+15～20ng/ml IGF-1+0.4～0.6μg/ml氢化可的松+青链霉素100u/ml；本发明突破传统培养基只添加表皮生长因子的局限，添加了胰岛素样生长因子，并摸索出这种因子的适宜比例，采用在培养基添加成纤维细胞条件培养基的方法，替代用成纤维细胞共培养的方法。本发明用激素、细胞因子组合及成纤维细胞条件培养基和BSA补充了因不添加血清而导致的营养因子的不足，完全满足表皮干细胞体外长期扩增培养的营养需求，是一种理想的可商品化生产的无血清培养基。
-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1563360A
公开(公告)日：2005-01-12
申请号：CN200410025938.5
申请日：2004-03-12
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明公开了关中奶山羊表皮干细胞无血清培养基的制备方法，包括成纤维细胞条件培养基和IGF－1、EGF、GSFCM适宜添加浓度的筛选，最后确定培养基配方为：F12+1～1.2％BSA+20～25％GSFCM+20～25ng/ mlEGF+5ug/ ml insulin+15～20ng/ml IGF－1+0.4～0.6μg/ml氢化可的松＋青链霉素100u/ml；本发明突破传统培养基只添加表皮生长因子的局限，添加了胰岛素样生长因子，并摸索出这种因子的适宜比例，采用在培养基添加成纤维细胞条件培养基的方法，替代用成纤维细胞共培养的方法。本发明用激素、细胞因子组合及成纤维细胞条件培养基和BSA补充了因不添加血清而导致的营养因子的不足，完全满足表皮干细胞体外长期扩增培养的营养需求，是一种理想的可商品化生产的无血清培养基。
-
公开(公告)号：CN1865436A
公开(公告)日：2006-11-22
申请号：CN200610041977.3
申请日：2006-03-27
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种分离纯化皮肤表皮干细胞的方法，在皮肤组织块培养过程中采用自行设计的培养基能有效抑制成纤维细胞的生长，从组织块四周生长出均一的上皮样细胞，诱发表皮干细胞迁移出原来的微环境，在新生成的上皮样细胞层上重新聚集生长。这类克隆性生长的细胞与其共生的上皮样细胞有明显形态学上的差别。借助解剖镜和玻璃针就能将其挑选出来，进行单独扩增培养。对所获得细胞进行当前同行公认的表皮干细胞分子标志的检测：CK19，β1－integrin，P63，α6－integrin均为阳性，即证明所分选的是纯化的表皮干细胞。本发明克服了传统酶消化法的缺点，直接利用干细胞的生物学行为获得纯化的表皮干细胞，可用于人类和哺乳动物表皮干细胞的分离纯化。
-
公开(公告)号：CN1865434A
公开(公告)日：2006-11-22
申请号：CN200610041978.8
申请日：2006-03-27
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明公开了一种建立成年关中奶山羊皮肤表皮干细胞系的方法，该方法将已脱离关中奶山羊体的耳中部一块0.5cm×0.5cm大小的皮肤，切成0.1～0.2cm×0.1～0.2cm的组织块，按表皮面朝上贴于玻璃或塑料平皿中，加培养基，在37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱内培养，培养后离散成单个细胞，用移胚管将单个细胞移入塑料皿中，用无血清培养基培养，待干细胞增殖至70％～80％融合时，用0.2％胰酶+0.02％EDTA进行消化传代培养，直至传至25代，冷冻大量种子细胞，即为建立的成年关中奶山羊皮肤表皮干细胞系。本发明的方法建立的关中奶山羊皮肤表皮干细胞系，不仅可用于克隆转基因动物的研究和生产，而且可用于该品种的遗传特征研究与保种；同时也是组织工程皮肤研究的理想实验材料。
-
公开(公告)号：CN1563365A
公开(公告)日：2005-01-12
申请号：CN200410025939.X
申请日：2004-03-12
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种分离纯化皮肤表皮干细胞的方法，在皮肤组织块培养过程中采用自行设计的培养基能有效抑制成纤维细胞的生长，从组织块四周生长出均一的上皮样细胞，诱发表皮干细胞迁移出原来的微环境，在新生成的上皮样细胞层上重新聚集生长。这类克隆性生长的细胞与其依赖的滋养层细胞有明显形态学上的差别。借助解剖镜和玻璃针就能将其挑选出来，进行单独扩增培养。对所获得细胞进行当前同行公认的表皮干细胞分子标志的检测：CK19，integrin－β1，p63，integrin－α6均为阳性，即证明所分选的是纯化的表皮干细胞。本发明克服了传统酶消化法的缺点，直接利用干细胞的生物学行为获得纯化的表皮干细胞，可用于人类和哺乳动物表皮干细胞的分离纯化。
-
公开(公告)号：CN1563361A
公开(公告)日：2005-01-12
申请号：CN200410025964.8
申请日：2004-03-18
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明公开了一种成年关中奶山羊皮肤表皮干细胞系，采用组织块培养法和克隆筛选法，分离纯化关中奶山羊表皮干细胞，并采用无血清培养体系，不需滋养层细胞，实现了关中奶山羊表皮干细胞体外长期扩增，传25代冻存。已冻存2～2.5×108个种子细胞。该类细胞体外倍增时间为28～30小时，细胞直径9～13um之间，测定了其生长曲线和克隆形成率。经免疫组织化学法鉴定表明，所分离的表皮干细胞原代表现为OCt－4阳性，证明其具有与ES细胞类似的分化潜能。传代后的表皮干细胞CK19，integrin－β1，P63阳性，具有表皮干细胞的典型特性。本发明建立的关中奶山羊表皮干细胞系，是组织工程化皮肤研究的理想实验材料，可用于克隆动物及克隆转基因动物生产。
-
-
-
-
-
-
-
-
Search Results
9
records
(took 0.023 seconds)
