公开(公告)号：CN101294221B

公开(公告)日：2011-05-04

申请号：CN200810071267.4

申请日：2008-06-23

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 陈平华 ,  王恒波 ,  陈由强 ,  陈如凯 ,  许莉萍 ,  郭晋隆 ,  徐景升 ,  蔡澜峰 ,  潘永保

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/10

Abstract: 一种大批量快速制备PCR模板的方法，属植物分子检测技术领域，具体涉及植物组织在裂解液中加热裂解和裂解液中和。本发明的技术方案是：将微量植物叶片放入一定体积的裂解液中加热裂解，然后中和，反应混合液可直接作为PCR反应的模板，在添加适量聚合酶稳定剂的情况下，PCR反应稳定，重复性强。该方法特别适宜大批量PCR反应模板的快速制备，可以大幅度提高分子检测和遗传分析的效率，极显著地降低成本。

公开(公告)号：CN100572560C

公开(公告)日：2009-12-23

申请号：CN200710008694.3

申请日：2007-03-14

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 陈平华 ,  潘永保 ,  陈如凯

IPC: C12Q1/68 ,  C12P19/34

Abstract: 本发明公开一种植物单花粉高通量收集与PCR检测方法，包括步骤为：显微镜分离花粉以及花粉破囊壁和染色；分装碱性裂解液于PCR板中，密封并离心使裂解液沉于管底；显微镜下用特殊镊子挑选着色单花粉粒并放入PCR管裂解液中；分装矿物油于PCR板中，短暂离心；置于PCR仪上90-98℃温度下裂解；在各管中加入TE缓冲液中和，离心，加入PCR反应成分；短暂离心，置于PCR仪上，反应参数为：90-98℃保持3-8分钟，热循环依不同反应而定，循环数为35-40，最后72℃延伸5-10分钟，保持于4℃下；PCR产物用电泳分离并在成像系统上进行扫描拍照。本发明具有效率高等优点，特别适用于生殖遗传统计分析。

公开(公告)号：CN101294221A

公开(公告)日：2008-10-29

申请号：CN200810071267.4

申请日：2008-06-23

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 陈平华 ,  王恒波 ,  陈由强 ,  陈如凯 ,  许莉萍 ,  郭晋隆 ,  徐景升 ,  蔡澜峰 ,  潘永保

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/10

Abstract: 一种大批量快速制备PCR模板的方法，属植物分子检测技术领域，具体涉及植物组织在裂解液中加热裂解和裂解液中和。本发明的技术方案是：将微量植物叶片放入一定体积的裂解液中加热裂解，然后中和，反应混合液可直接作为PCR反应的模板，在添加适量聚合酶稳定剂的情况下，PCR反应稳定，重复性强。该方法特别适宜大批量PCR反应模板的快速制备，可以大幅度提高分子检测和遗传分析的效率，极显著地降低成本。

公开(公告)号：CN101328501A

公开(公告)日：2008-12-24

申请号：CN200810071436.4

申请日：2008-07-23

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 高三基 ,  潘永保 ,  陈平华 ,  陈如凯 ,  许莉萍 ,  张华 ,  徐景升

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

Abstract: 本发明涉及甘蔗RSD病菌的快速裂解和PCR检测技术。本发明通过Buffer A和Buffer B裂解甘蔗RSD病菌，用PCR检测技术快速检测出Leifsonia xyli subsp.xyli病菌。本发明的检测灵敏度比常规CTAB裂解提取DNA的方法高，且具有快速、简便、成本低、无污染的特点，具备较高的灵敏性和准确性。本发明可用于大规模甘蔗RSD病菌的PCR检测。

公开(公告)号：CN101020925A

公开(公告)日：2007-08-22

申请号：CN200710008694.3

申请日：2007-03-14

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 陈平华 ,  潘永保 ,  陈如凯

IPC: C12Q1/68 ,  C12P19/34

Abstract: 本发明公开一种植物单花粉高通量收集与PCR检测方法，包括步骤为：显微镜分离花粉以及花粉破囊壁和染色；分装碱性裂解液于PCR板中，密封并离心使裂解液沉于管底；显微镜下用特殊镊子挑选着色单花粉粒并放入PCR管裂解液中；分装矿物油于PCR板中，短暂离心；置于PCR仪上90－98℃温度下裂解；在各管中加入TE缓冲液中和，离心，加入PCR反应成分；短暂离心，置于PCR仪上，反应参数为：90－98℃保持3－8分钟，热循环依不同反应而定，循环数为35－40，最后72℃延伸5－10分钟，保持于4℃下；PCR产物用电泳分离并在成像系统上进行扫描拍照。本发明具有效率高等优点，特别适用于生殖遗传统计分析。

公开(公告)号：CN101328491A

公开(公告)日：2008-12-24

申请号：CN200810071435.X

申请日：2008-07-23

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 陈平华 ,  高三基 ,  陈由强 ,  许莉萍 ,  陈如凯 ,  徐景升 ,  郭晋隆 ,  张华 ,  王恒波 ,  蔡澜峰 ,  潘永保

IPC: C12P19/34 ,  C12Q1/68

Abstract: 植物单花粉全基因组扩增库的快速制备方法，具体涉及植物单花粉的分离、快速裂解和全基因组复制扩增。本发明的技术方案是：在载玻片上将花粉染色、干燥，制备花粉粒玻片；应用一种显微解剖镊子在显微镜下分离单个花粉，放入PCR管中，在碱和表面活性剂溶液中裂解后用TE缓冲溶液中和。裂解混合液直接作为模板在试剂盒Genomiphi DNA Amplification Kit方法中工作，将单个花粉的DNA复制扩增出大量全基因组，该方法能应用于大批量单花粉收集并制备全基因组，为植物单倍体遗传规律分析和通过单倍体染色体制图提供了一种新的途径。