公开(公告)号：CN104531745A

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201410746849.3

申请日：2014-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  程毅鹏 ,  杨套伟 ,  满在伟 ,  徐美娟 ,  张显

IPC: C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12P25/00 ,  C12R1/125

Abstract: 我们首次将抗性基因sat整合到质粒pMA5上构建出新的具有NTC抗性质粒pMA5-sat。另外，实验室前期筛选获得一株核黄素生产菌Bacillus subtilis RF1，该菌株对多种常规抗生素都有一定的抗性，所以对于该菌株运用质粒表达外源基因的抗性筛选造成了困难。为了验证所构建新型质粒的实用性，首次将来自Bacillus subtilis RF1自身的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因zwf连接抗性质粒pMA5-sat上，得到表达载体pMA5-sat-zwf,将表达载体转化到核黄素生产菌Bacillus subtilis RF1中得到重组菌Bacillus subtilis RF1/pMA5-sat-zwf。多次发酵罐结果表明重组菌发酵60h核黄素产量达到12.01g/L，比原始菌的9.22g/L提高了30.3％。说明新构建的重组质粒pMA5-sat能够用于枯草芽孢杆菌的代谢改造。

公开(公告)号：CN104531745B

公开(公告)日：2018-05-04

申请号：CN201410746849.3

申请日：2014-12-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  程毅鹏 ,  杨套伟 ,  满在伟 ,  徐美娟 ,  张显

IPC: C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12P25/00 ,  C12R1/125

Abstract: 我们首次将抗性基因sat整合到质粒pMA5上构建出新的具有NTC抗性质粒pMA5‑sat。另外，实验室前期筛选获得一株核黄素生产菌Bacillus subtilis RF1，该菌株对多种常规抗生素都有一定的抗性，所以对于该菌株运用质粒表达外源基因的抗性筛选造成了困难。为了验证所构建新型质粒的实用性，首次将来自Bacillus subtilis RF1自身的葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶基因zwf连接抗性质粒pMA5‑sat上，得到表达载体pMA5‑sat‑zwf,将表达载体转化到核黄素生产菌Bacillus subtilis RF1中得到重组菌Bacillus subtilis RF1/pMA5‑sat‑zwf。多次发酵罐结果表明重组菌发酵60h核黄素产量达到12.01g/L，比原始菌的9.22g/L提高了30.3％。说明新构建的重组质粒pMA5‑sat能够用于枯草芽孢杆菌的代谢改造。