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公开(公告)号:CN105385703A
公开(公告)日:2016-03-09
申请号:CN201510702317.4
申请日:2015-10-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 高产反式-4-羟脯氨酸sucA基因敲除菌的构建。本发明公开了一种利用基因敲除获得反式-4-羟基-L-脯氨酸的生物合成方法。在大肠杆菌BL21(DE3)△putA的基础上敲除基因sucA,打断TCA循环中由α-酮戊二酸生成琥珀酸(由α-酮戊二酸脱氢酶复合体催化的)的过程,同时插入反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶基因(hyp),之后转入质粒pUC19-Ptrp2-hyp-vgb。由羟化酶取代α-酮戊二酸脱氢酶的作用,“回补”TCA循环过程,保证TCA循环进行的同时产生羟脯氨酸。本发明还公开了所述重组大肠杆菌在生产反式-4-羟脯氨酸中的应用,摇瓶发酵结果表明,培养基优化后的羟脯氨酸产量为1344.1mg/L,是优化前的5.53倍左右。与同样转入质粒pUC19-Ptrp2-hyp-vgb的原菌相比,在产羟脯氨酸方面具有优势。