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公开(公告)号：CN103805629B
公开(公告)日：2016-10-05
申请号：CN201410042060.X
申请日：2014-01-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的毕赤酵母真核表达方法。该方法以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，在其两端加入酶切位点和组氨酸标签，并亚克隆至组成型表达载体pGAP9K以构建重组质粒，酶切线性化后电转化毕赤酵母，筛选阳性克隆转化子，接种至发酵培养基进行液体发酵培养，取发酵液上清，即得AMP脱氨酶表达产物。本发明首次在毕赤酵母中成功表达了鼠灰链霉菌来源的AMP脱氨酶，实验结显示该重组酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，易于纯化，可应用于食品、医药等领域，为AMP脱氨酶的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103757035B
公开(公告)日：2016-09-28
申请号：CN201410040528.1
申请日：2014-01-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法。该方法以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，在其两端分别引入酶切位点，并亚克隆入表达载体pKLAC1构建得到重组质粒，酶切线性化后电转化乳酸克鲁维酵母，筛选阳性克隆转化子，再利用pKLAC1通用引物筛选出多拷贝转化子，最后经种子培养和液体发酵培养，取发酵液上清，即得AMP脱氨酶表达产物。本发明首次在乳酸克鲁维酵母中成功表达了鼠灰链霉菌来源的AMP脱氨酶，实验结显示该重组酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，可应用于食品、医药等领域。
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公开(公告)号：CN103773792A
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201410039809.5
申请日：2014-01-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的原核表达方法，该方法以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，并在其两端加入酶切位点，亚克隆至表达载体构建重组质粒，再将该重组质粒转化大肠杆菌感受态，最后IPTG诱导表达，纯化，得AMP脱氨酶表达终产物。本发明首次在大肠杆菌中成功表达了鼠灰链霉菌来源的AMP脱氨酶，实验结果显示该重组酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，易于纯化，可应用于食品、医药领域，为AMP脱氨酶的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103757035A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201410040528.1
申请日：2014-01-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法。该方法以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，在其两端分别引入酶切位点，并亚克隆入表达载体pKLAC1构建得到重组质粒，酶切线性化后电转化乳酸克鲁维酵母，筛选阳性克隆转化子，再利用pKLAC1通用引物筛选出多拷贝转化子，最后经种子培养和液体发酵培养，取发酵液上清，即得AMP脱氨酶表达产物。本发明首次在乳酸克鲁维酵母中成功表达了鼠灰链霉菌来源的AMP脱氨酶，实验结显示该重组酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，可应用于食品、医药等领域。
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公开(公告)号：CN103805629A
公开(公告)日：2014-05-21
申请号：CN201410042060.X
申请日：2014-01-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种鼠灰链霉菌AMP脱氨酶基因的毕赤酵母真核表达方法。该方法以鼠灰链霉菌基因组为模板，设计特异性引物扩增AMP脱氨酶基因序列，在其两端加入酶切位点和组氨酸标签，并亚克隆至组成型表达载体pGAP9K以构建重组质粒，酶切线性化后电转化毕赤酵母，筛选阳性克隆转化子，接种至发酵培养基进行液体发酵培养，取发酵液上清，即得AMP脱氨酶表达产物。本发明首次在毕赤酵母中成功表达了鼠灰链霉菌来源的AMP脱氨酶，实验结显示该重组酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，易于纯化，可应用于食品、医药等领域，为AMP脱氨酶的工业化生产奠定了基础。
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