核酸内切酶DUF820-1的原核表达与制备方法及应用

    公开(公告)号:CN102492705A

    公开(公告)日:2012-06-13

    申请号:CN201110382899.4

    申请日:2011-11-25

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 核酸内切酶DUF820-1的原核表达与制备方法及应用,涉及核酸内切酶。从蓝藻Microcystis aeruginosa PCC7806染色体DNA上PCR扩增出DUF820-1基因,将其克隆到表达载体pET-His中,将构建成功的重组质粒pET-DUF820-1转化大肠杆菌,实现DUF820-1在大肠杆菌中的大量诱导表达。将诱导表达菌超声破碎后用Ni-NTA琼脂糖树脂纯化可得DUF820-1蛋白。DNA酶切实验表明,表达纯化的DUF820-1蛋白具有核酸内切酶的活性,在合适的反应缓冲液中能酶切环状质粒DNA和染色体DNA。该酶在30~64℃温度内具有核酸内切酶活性,其最适反应温度为61℃。

    一种防止转基因荧光观赏鱼基因漂移的方法

    公开(公告)号:CN118556652A

    公开(公告)日:2024-08-30

    申请号:CN202410767578.3

    申请日:2024-06-14

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 一种防止转基因荧光观赏鱼基因漂移的方法,属于生物技术领域。通过设计一个特异性敲除靶点,利用CRISPR/Cas9技术对鱼类生殖发育的关键基因vasa进行敲除,敲除后将F0代嵌合体与野生型鱼进行配对产生可育的F1代杂合子,之后将F1代杂合子自交即可得到F2代纯合子,纯合子表型为全部雄性且不育。通过本方法,可以构建vasa基因敲除的转基因荧光观赏鱼家系,且获得不育的雄性个体,该方法对于防止转基因鱼类荧光基因漂移以及保护品种权具有重大意义。

    肌细胞特异表达mCherry荧光蛋白斑马鱼家系构建方法

    公开(公告)号:CN105274140A

    公开(公告)日:2016-01-27

    申请号:CN201510708986.2

    申请日:2015-10-28

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 陈仕玺 黄晶

    Abstract: 肌细胞特异表达mCherry荧光蛋白斑马鱼家系构建方法,属于转基因领域,涉及斑马鱼。采用PCR方法,从斑马鱼基因组中得到肌球蛋白轻链2基因的启动区序列;利用pCS2-mCherry质粒和pminiTol2空载体,构建pminiTol2-Mlc2f-mCherry质粒;通过对斑马鱼胚胎进行显微注射的方法,构建肌细胞特异表达mCherry荧光蛋白斑马鱼家系。选用一种新的荧光蛋白基因mCherry,应用了Tol2转座子体系来构建在肌细胞中特异表达的mCherry荧光蛋白斑马鱼家系。

    一种糖皮质激素的检测方法

    公开(公告)号:CN114592005B

    公开(公告)日:2023-12-19

    申请号:CN202210383164.1

    申请日:2022-04-12

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 黄晶 陈仕玺

    Abstract: 一种糖皮质激素的检测方法,涉及检测技术领域。用人凝血因子f5基因启动子连接荧光素酶报告基因载体,构建报告质粒,将报告质粒、人糖皮质激素受体表达质粒以及内参质粒共转染HEK293T细胞,用待测样品刺激转染后的HEK293T细胞,通过检测荧光素酶的活性来检测样品中的糖皮质激素。检测方法重复性好、灵敏度高,检测结果可靠,且操作简单方便,可广泛应用于糖皮质激素检测。

    一种糖皮质激素的检测方法

    公开(公告)号:CN114592005A

    公开(公告)日:2022-06-07

    申请号:CN202210383164.1

    申请日:2022-04-12

    Applicant: 厦门大学

    Inventor: 黄晶 陈仕玺

    Abstract: 一种糖皮质激素的检测方法,涉及检测技术领域。用人凝血因子f5基因启动子连接荧光素酶报告基因载体,构建报告质粒,将报告质粒、人糖皮质激素受体表达质粒以及内参质粒共转染HEK293T细胞,用待测样品刺激转染后的HEK293T细胞,通过检测荧光素酶的活性来检测样品中的糖皮质激素。检测方法重复性好、灵敏度高,检测结果可靠,且操作简单方便,可广泛应用于糖皮质激素检测。

    核酸内切酶DUF820-2的原核表达与制备方法及应用

    公开(公告)号:CN102433350A

    公开(公告)日:2012-05-02

    申请号:CN201110381716.7

    申请日:2011-11-25

    Applicant: 厦门大学

    Abstract: 核酸内切酶DUF820-2的原核表达与制备方法及应用,涉及核酸内切酶。从蓝藻Microcystis aeruginosa PCC7806染色体DNA上PCR扩增出DUF820-2基因,再克隆到表达载体pGEX-6p-1中,将重组质粒pGEX-DUF820-2转化大肠杆菌,实现DUF820-2在大肠杆菌中的诱导表达。将诱导表达菌用Ni-NTA琼脂糖树脂纯化得DUF820-2蛋白。DNA酶切实验表明,表达纯化的DUF820-2蛋白具有核酸内切酶的活性,在反应缓冲液中能酶切环状质粒DNA和染色体DNA。该酶在30~64℃温度范围内具有核酸内切酶活性。具有比现有市售的核酸内切酶更广泛的应用范围和前景。

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