公开(公告)号：CN103834687A

公开(公告)日：2014-06-04

申请号：CN201410064467.2

申请日：2014-02-25

Applicant: 南通大学

Inventor： 方政 ,  王慧 ,  方浩 ,  陆施娟 ,  徐倩 ,  胡迎青 ,  童海燕 ,  徐邦生

IPC: C12N15/85 ,  C07K14/435 ,  A61K39/00 ,  C12N15/66 ,  A61P33/10

CPC classification number: Y02A50/421

Abstract: 本发明公开了一种周期型马来丝虫复合多价蛋白疫苗的制备方法，包括周期型马来丝虫pcDNA3.1（+）-BmCPI/BmGAPDH重组质粒的抽提、基因转染、阳性克隆的筛选、阳性克隆的提取和扩大培养、阳性克隆的冻存、检测阳性克隆，抽提细胞总RNA，分子水平检测重组质粒在细胞中的表达、蛋白水平检测重组质粒在细胞中的表达、表达产物进行SDS-PAGE分析、周期性马来丝虫重组蛋白的提取和纯化等步骤。本发明方法简便、效果好。

公开(公告)号：CN103191420A

公开(公告)日：2013-07-10

申请号：CN201310111734.2

申请日：2013-04-01

Applicant: 南通大学

Inventor： 方政 ,  王慧 ,  方浩 ,  陆施娟 ,  胡迎青 ,  徐邦生

IPC: A61K39/00 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  A61P33/10

CPC classification number: Y02A50/421

Abstract: 本发明公开了一种周期型马来丝虫复合多价DNA疫苗的制备方法，包括引物设计、PCR扩增BmGAPDH、BmCPI基因、BmGAPDH、BmCPI基因片段纯化和T载体的连接以及转化、I阳性重组克隆的筛选和鉴定、I重组表达质粒构建与鉴定、重组质粒的大量抽提纯化等步骤。本发明制备方便，效果好；以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂/3-磷酸甘油醛脱氢酶真核表达重组质粒。试验结果证明了该复合多价DNA疫苗可诱导小鼠产生特异性的免疫应答反应，取得满意效果，制备周期型马来丝虫复合多价DNA疫苗获得成功。