公开(公告)号：CN117126764A

公开(公告)日：2023-11-28

申请号：CN202310714730.7

申请日：2023-06-16

Applicant: 南昌大学第一附属医院

Inventor： 黎萍 ,  祝兰兰 ,  刘洋 ,  向天新 ,  罗宛莺 ,  彭婷秀 ,  何志勇 ,  罗帅 ,  廖文建 ,  张伟

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/02 ,  C12N1/06 ,  C12R1/22

Abstract: 本发明涉及一种肺炎克雷伯菌外膜囊泡的提取方法，包括如下步骤：S1、单菌落摇菌过夜；S2、1：100接种培养肺炎克雷伯菌菌液，37℃摇床6‑8小时，监测菌液OD600nm达到1.0；S3、低速离心，回收上清：菌液以11000×g离心，4℃，20分钟，上清11000×g离心，4℃，20分钟离心一次；S4、中速离心，回收上清：上清13000×g离心，4℃，20分钟离心一次；S5、回收上清，用PVDF膜滤器进行过滤2次；S6、超高速离心粗提外膜囊泡：将过滤的上清转移到超离心管中，使用T70i rotor转子，150,000×g，4℃，1.5h，弃去上清；S7、密度梯度离心提纯外膜囊泡：超离管中加入不连续密度梯度OptiPrep，使用SW40 Tirotor转子，4°C，150000×g，16小时，弃去上清。本发明的方法实现了蔗糖垫超高速离心提取高纯度和高产量肺炎克雷伯菌OMVs。