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公开(公告)号：CN102191266A
公开(公告)日：2011-09-21
申请号：CN201110084892.4
申请日：2011-04-06
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明涉及生物合成番茄红素的方法，尤其是一种使杜氏藻(Dunaliella)能够累积高含量的番茄红素的方法。通过提取杜氏盐藻基因组DNA，并克隆其番茄红素-β-环化酶(LycB)基因，然后构建lycB基因敲除载体并转化进杜氏盐藻细胞，经筛选和鉴定获取了lycB基因被敲除杜氏藻，该杜氏藻的lycB基因的表达被抑制，细胞生物合成β-胡萝卜素的过程被阻止于番茄红素阶段，胁迫条件下能够在生物体内大量累积番茄红素，番茄红素的含量可以达到藻体干重的3％～4％。本发明的方法是大量、廉价地获取天然番茄红素的新途径。
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公开(公告)号：CN101671693A
公开(公告)日：2010-03-17
申请号：CN200910068851.9
申请日：2009-05-15
Applicant: 南开大学
IPC: C12N15/82
Abstract: 本发明提供一种培育高α-生育酚大豆的方法，步骤如下：从甘蓝型油菜中分离出γ-生育酚甲基转移酶基因，将其与种子特异性启动子连接构建成植物表达载体，通过农杆菌介导的方法感染大豆胚尖，经含50mg/L卡那霉素培养基连续抗性筛选获得再生芽，然后将其转入含生根剂2mg/L的培养基中，生根率达100％。本发明所提供的方法具有取材方便，转化效率高，培养周期短，操作简单，移栽成活率高的特点。本发明所培育的大豆种子中原有的γ-生育酚全部转化为α型。鉴于α-生育酚抗氧化活性高，是人体优先利用的形式，因此本发明所培育的大豆维生素E营养价值高，有助于通过食物链使普通民众均享受到维生素E所带来的健康福利。该方法也适用于其他油料作物维生素E组分的改造。
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公开(公告)号：CN102191265A
公开(公告)日：2011-09-21
申请号：CN201110084069.3
申请日：2011-04-06
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明涉及杜氏藻(Dunaliella)基因工程，特别是关于杜氏藻番茄红素-β-环化酶(LycB)基因敲除载体及其应用。在lycB基因敲除载体中包含筛选标记基因，并接入了lycB基因的3′端同源重组区和5′同源重组区，该载体应用于培育lycB基因被敲除的杜氏藻。敲除了lycB基因的杜氏藻生物合成β-胡萝卜素的过程被阻止于番茄红素阶段，在胁迫条件下能够累积高含量的番茄红素，累积量可达藻体干重的3％～4％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101429509A
公开(公告)日：2009-05-13
申请号：CN200810152751.X
申请日：2008-10-31
Applicant: 南开大学
Abstract: 一种适合于维生素E代谢工程的种子特异性启动子。本发明在于使维生素E代谢相关的基因在转基因植物中高效表达，以克服贮存蛋白类启动子在种子胚胎发育晚期才指导外源基因表达的缺陷，从而增加目的基因产物在种子中的积累量。本发明所述的适合于维生素E代谢工程的种子特异性启动子FAE1，其核苷酸序列是序列表所示的序列。本发明还提供了含有上述启动子的重组质粒pMD18－T－FAE1－γ－TMT及植物表达载体pFAE1－TMT。本发明所述的FAE1应用于转基因植物中，能有效地驱动维生素E代谢相关基因在转基因植物中高效表达，将在野生型种子中占优势形式的γ－生育酚和δ－生育酚分别全部转化成α－生育酚和β－生育酚。
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公开(公告)号：CN102251007A
公开(公告)日：2011-11-23
申请号：CN201110141815.8
申请日：2011-05-31
Applicant: 南开大学
IPC: C12P23/00 , C12N15/113 , C12N15/63 , C12N1/13 , C12R1/89
Abstract: 本发明涉及生物合成番茄红素的方法，特别是利用RNA干扰技术使杜氏藻(Dunaliella)能够累积高含量番茄红素的方法。根据杜氏藻cDNA序列设计特异性引物，克隆目标RNA干扰片段，然后构建RNA干扰表达载体，并转化进杜氏藻细胞，经筛选和PCR鉴定获取了RNA干扰的杜氏藻，该杜氏藻的番茄红素-β-环化酶基因的表达被抑制，细胞生物合成β-胡萝卜素的过程被阻止于番茄红素阶段，在3.0mol/L盐浓度、氮缺乏及强光胁迫条件下能够在生物体内大量累积番茄红素，其番茄红素的含量增加到起始杜氏藻的14～16倍。本发明的方法是大量、廉价地获取天然番茄红素的新途径。
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公开(公告)号：CN1302108C
公开(公告)日：2007-02-28
申请号：CN200410072385.9
申请日：2004-10-26
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明涉及用于T-A克隆的pG7X-T载体及其制备方法，属于重组DNA技术的载体构建领域，其技术方案是利用自行设计的引物对质粒pGEM7Zf(+)进行扩增，扩增产物经HindIII消化、自连、转化、筛选等过程，获得新质粒pG7X。相比pGEM7Zf(+)而言，pG7X增加了2个XcmI识别位点，可用于制备T-A克隆载体。用XcmI酶切后得到的两端带有3′dT粘性末端的DNA即为T载体，命名为pG7X-T。该T载体与带有dA末端DNA片段或PCR产物进行连接，阳性重组率达95%以上。利用本发明制备T载体的成本在60元/微克以下，仅为市场价格的十分之一，而且操作简便、性能稳定、重组率高。
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公开(公告)号：CN103451237A
公开(公告)日：2013-12-18
申请号：CN201310450442.1
申请日：2013-09-27
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明涉及番茄红素的生产，尤其是指通过三孢布拉氏霉菌发酵生产番茄红素的方法。首先进行三孢布拉氏霉菌ATCC14271(+)和ATCC14272(-)的种子培养，然后将种子按湿重比1：2的比例混合接入改良的发酵培养基中，发酵培养48小时后，向培养基中加入三丙胺作为代谢阻遏剂，继续培养4天，提取番茄红素。该方法相比于传统未加阻遏剂的方法，番茄红素产量提高15.8倍。本发明方法简单、易于操作，可以大幅提高三孢布拉氏霉菌生产番茄红素的产量。
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公开(公告)号：CN1614018A
公开(公告)日：2005-05-11
申请号：CN200410072385.9
申请日：2004-10-26
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明涉及用于T－A克隆的pG7X－T载体及其制备方法，属于重组DNA技术的载体构建领域，其技术方案是利用自行设计的引物对质粒pGEM7Zf(+)进行扩增，扩增产物经HindIII消化、自连、转化、筛选等过程，获得新质粒pG7X。相比pGEM7Zf(+)而言，pG7X增加了2个XcmI识别位点，可用于制备T－A克隆载体。用XcmI酶切后得到的两端带有3′dT粘性末端的DNA即为T载体，命名为pG7X－T。该T载体与带有dA末端DNA片段或PCR产物进行连接，阳性重组率达95％以上。利用本发明制备T载体的成本在60元/微克以下，仅为市场价格的十分之一，而且操作简便、性能稳定、重组率高。
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