公开(公告)号：CN108220253A

公开(公告)日：2018-06-29

申请号：CN201710927229.3

申请日：2017-10-09

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 朱丽华 ,  林丽 ,  林凤玲 ,  徐武 ,  叶建仁

IPC: C12N7/02

Abstract: 本发明公开了一种分离松材线虫体内病毒的方法，包括：大量培养松材线虫；收集松材线虫；将松材线虫虫液反复冻融后用玻璃匀浆器匀浆；用细菌过滤器将松材线虫匀浆过滤；低速离心，获得粗提液，再用PEG进行沉淀，然后用蔗糖密度梯度超速离心，分层收集样品，再去蔗糖，即可获得松材线虫病毒粗提物。本发明的分离松材线虫体内病毒的方法，利用反复冻融裂解细胞，再经匀浆器匀浆，将病毒颗粒从松材线虫体内释放出来，采用细菌过滤器过滤和低速离心，去除大的细胞碎片，通过PEG沉淀收集病毒沉淀物，进而用蔗糖密度梯度超速离心，分层收集离心产物，再去蔗糖后获得松材线虫病毒粗提物，是一种简易且成功的方法。

公开(公告)号：CN108220253B

公开(公告)日：2019-11-05

申请号：CN201710927229.3

申请日：2017-10-09

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 朱丽华 ,  林丽 ,  林凤玲 ,  徐武 ,  叶建仁

IPC: C12N7/02

Abstract: 本发明公开了一种分离松材线虫体内病毒的方法，包括：大量培养松材线虫；收集松材线虫；将松材线虫虫液反复冻融后用玻璃匀浆器匀浆；用细菌过滤器将松材线虫匀浆过滤；低速离心，获得粗提液，再用PEG进行沉淀，然后用蔗糖密度梯度超速离心，分层收集样品，再去蔗糖，即可获得松材线虫病毒粗提物。本发明的分离松材线虫体内病毒的方法，利用反复冻融裂解细胞，再经匀浆器匀浆，将病毒颗粒从松材线虫体内释放出来，采用细菌过滤器过滤和低速离心，去除大的细胞碎片，通过PEG沉淀收集病毒沉淀物，进而用蔗糖密度梯度超速离心，分层收集离心产物，再去蔗糖后获得松材线虫病毒粗提物，是一种简易且成功的方法。

公开(公告)号：CN107616096A

公开(公告)日：2018-01-23

申请号：CN201711088697.2

申请日：2017-11-08

Applicant: 南京林业大学

Inventor： 朱丽华 ,  蒋鹏 ,  林凤玲 ,  徐武 ,  叶建仁

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种无菌松苗培养方法，包括：1）制备水琼脂培养基；2）取松树成熟种子，用洗洁精将其表面洗净，流水冲洗1 h，将水滤干，将种子倒入150 mL无菌三角瓶或50 mL无菌离心管中，加入30%H2O2，将种子浸没，浸泡10-25min，期间轻轻振荡，将30%H2O2消毒后的种子倒入置于无菌烧杯上的灭菌筛子中，用无菌水冲洗4-5次。3）无菌条件下，将种子接种到水琼脂平板中放置时使种子与种子之间留有间隙，培养皿用Parafilm封口膜封口；4）将培养皿置于25℃条件下，暗培养，直至种子无菌萌发。本发明的无菌松苗培养方法，多个松种、多次重复结果表明，采用该培养方法对松树种子进行消毒灭菌，污染率低、萌发率高，既提高了培养效率，又省却了废液处理成本，保护了环境，是一种简便且无污染的无菌松苗的制备方法。