公开(公告)号：CN102839195A

公开(公告)日：2012-12-26

申请号：CN201210248620.8

申请日：2012-07-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 樊惠英 ,  廖明 ,  陈春丽 ,  叶昱 ,  张杰

IPC: C12N15/866 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种利用pFast Bac Dual杆状病毒表达PCV2Cap蛋白的方法，该方法包括以下步骤：扩增带有His标签的编码PCV 2 Cap蛋白的基因片段；将上述基因片段连接到pFast Bac Dual质粒上，获得重组转移质粒pFast Bac-p10-ORF2-pH-ORF2；将重组转移质粒转化大肠杆菌DH10Bac，经蓝白斑筛选后得到重组穿梭载体Bac-p10-ORF2-pH-ORF2；将重组穿梭载体转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒Ac.Dual-Cap；将重组杆状病毒接毒于昆虫细胞，培养后收集昆虫细胞，将表达产物纯化后得到重组Cap蛋白。本发明方法解决了Cap蛋白在真核细胞中表达量低的难题。本发明方法重组的Cap蛋白设计有His标签，利于其后续的纯化，并且其生物活性优于原核表达系统所表达的Cap蛋白，可以应用于流行病学诊断方法的建立及PCV2亚单位疫苗的研发。

公开(公告)号：CN102839189A

公开(公告)日：2012-12-26

申请号：CN201210248633.5

申请日：2012-07-18

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 樊惠英 ,  廖明 ,  陈春丽 ,  叶昱 ,  张杰

IPC: C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种利用pCold-sumo表达载体高效表达PCV 2 Cap蛋白的方法，该方法包括以下步骤：抽提PCV 2病毒的DNA，扩增得到PCV 2去核定位信号肽的Cap蛋白的基因片段；将扩增片段连接到pCold-SUMO质粒中，构建重组质粒pCold-SUMO-dCap；将重组质粒转化大肠杆菌ArcticExpress Escherichia coli，然后低温诱导表达，表达产物经纯化后得到可溶性的sumo-dCap融合蛋白。本发明的方法能成功克服PCV 2 Cap蛋白在大肠埃希菌中不表达或是表达量极低的难题；本发明方法所表达的Cap蛋白主要以可溶性形式存在、纯化方法简单可行、纯化效果很好、具有很好的免疫学反应原性，可以应用于流行病学诊断方法的建立及疫苗的研究。