一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法

    公开(公告)号:CN112322573A

    公开(公告)日:2021-02-05

    申请号:CN202011203814.7

    申请日:2020-11-02

    Abstract: 本发明公开了一种人工诱导槭菌刺孢产生分生孢子的方法,包括以下步骤:用组织分离法从三七圆斑病病叶上分离槭菌刺孢,获得纯培养菌株;将纯化后的菌株接种到PDA培养基;在20℃全光照条件下的光照培养箱中培养5~7天;用灭菌的手术刀将培养好的槭菌刺孢菌落表面菌丝刮去后切割成圆形菌块;在无菌培养皿中加入无菌的ddH2O,再将菌块正面向上放入ddH2O中;将装有菌块的培养皿放入光照培养箱中光暗交替培养;15天后即可获得大量的分生孢子;本发明提出了一种新的分生孢子诱导方法,该方法操作简单,产孢稳定,且整个过程都是在无菌环境下操作的,可以获得纯净的分生孢子悬浮液。

    一种观察植物病原真菌侵染叶片的方法及应用

    公开(公告)号:CN114216886B

    公开(公告)日:2023-10-31

    申请号:CN202111381069.X

    申请日:2021-11-20

    Abstract: 本发明公开了一种观察植物病原真菌侵染叶片的方法及应用,该方法选用104spores/mL的三七圆斑病菌分生孢子悬浮液喷洒接种植物叶片,分别取接种后0h、6h、12h、24h、48h和96h的植物叶片样品,并将一个叶片切成若干小块,取一块载玻片,用移液枪吸取卡尔科弗卢尔荧光增白剂点滴到载玻片上,再分别取相同量的10%的KOH溶液点滴到卡尔科弗卢尔荧光增白剂液滴上,将小块叶片正面朝下放于卡尔科弗卢尔荧光增白剂和KOH的混合液的液面上,在放有叶片的载玻片上,放上另外一个载玻片,用回形针将两个玻片固定在一起,静置放置1min,用倒置荧光显微镜在10×10倍和10×20倍镜下进行观察,该方法可用于观察真菌分生孢子在寄主植物叶部表面的萌发至侵入过程。

    一种观察植物病原真菌侵染叶片的方法及应用

    公开(公告)号:CN114216886A

    公开(公告)日:2022-03-22

    申请号:CN202111381069.X

    申请日:2021-11-20

    Abstract: 本发明公开了一种观察植物病原真菌侵染叶片的方法及应用,该方法选用104spores/mL的三七圆斑病菌分生孢子悬浮液喷洒接种植物叶片,分别取接种后0h、6h、12h、24h、48h和96h的植物叶片样品,并将一个叶片切成若干小块,取一块载玻片,用移液枪吸取卡尔科弗卢尔荧光增白剂点滴到载玻片上,再分别取相同量的10%的KOH溶液点滴到卡尔科弗卢尔荧光增白剂液滴上,将小块叶片正面朝下放于卡尔科弗卢尔荧光增白剂和KOH的混合液的液面上,在放有叶片的载玻片上,放上另外一个载玻片,用回形针将两个玻片固定在一起,静置放置1min,用倒置荧光显微镜在10×10倍和10×20倍镜下进行观察,该方法可用于观察真菌分生孢子在寄主植物叶部表面的萌发至侵入过程。

    一种快速分离三七圆斑病菌单个分生孢子的方法

    公开(公告)号:CN112592831A

    公开(公告)日:2021-04-02

    申请号:CN202110015565.7

    申请日:2021-01-06

    Abstract: 本发明公开了一种快速分离三七圆斑病菌单个分生孢子的方法,(1)将田间采集回来的三七圆斑病叶片在常温下风干;(2)在生物显微镜下观察病斑部位,寻找分生孢子密集处,用移液枪吸取10μL无菌水打到该部位并反复抽吸4‑5次,病斑上的分生孢子将进入到无菌水当中成为孢子悬浮液,然后把孢子悬浮液吸取到水琼脂培养基上并轻轻涂匀。(3)立即在显微镜下寻找水琼脂培养基表面的分生孢子,然后用灭菌挑针蘸取无菌水后移至孢子处吸附单个孢子;(4)将吸附有单个孢子的挑针在PDA培养基上进行多次划线,用封口膜封口后在恒温培养箱中培养。本发明直接利用挑针上无菌水的粘附作用获得单个分生孢子,分离效果更加精准,且不容易污染。

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