公开(公告)号：CN103278486A

公开(公告)日：2013-09-04

申请号：CN201310187211.6

申请日：2013-05-20

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨静 ,  李成云 ,  刘林 ,  朱有勇 ,  杜云龙 ,  徐畅 ,  施竹凤

IPC: G01N21/64 ,  G01N1/30

Abstract: 本发明公开了一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法，该方法采用GFP融合蛋白处理水稻根尖，将处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片，切片后PI荧光染料进行染色，共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽。该方法利用GFP融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处，叶芽被冷冻切片后PI染色，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽，能直接定性地了解GFP融合蛋白在水稻植株内的长距离转运情况，可为进一步开展效应蛋白能引起水稻系统防御反应提供非常强有力的证据；此外，该方法简便、准确、快速，具有重要的使用价值。

公开(公告)号：CN103175810B

公开(公告)日：2015-09-02

申请号：CN201210554731.1

申请日：2012-12-05

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨静 ,  李成云 ,  刘林 ,  朱有勇 ,  杜云龙 ,  徐畅 ,  施竹凤

IPC: G01N21/64 ,  G01N1/30

CPC classification number: G01N21/6458

Abstract: 本发明公开了一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法，该方法将GFP融合蛋白处理水稻根尖后，处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片，切片后PI荧光染料进行染色，共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽。该方法利用GFP融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处，叶芽被冷冻切片后PI染色，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽，能直接定性地了解GFP融合蛋白在水稻植株内的长距离转运情况。GFP融合蛋白直接处理水稻根尖0.5cm处，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白转运至叶芽可为进一步开展效应蛋白能引起水稻系统防御反应提供非常强有力的证据。该方法简便、准确、快速。

公开(公告)号：CN103175810A

公开(公告)日：2013-06-26

申请号：CN201210554731.1

申请日：2012-12-05

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨静 ,  李成云 ,  刘林 ,  朱有勇 ,  杜云龙 ,  徐畅 ,  施竹凤

IPC: G01N21/64 ,  G01N1/30

CPC classification number: G01N21/6458

Abstract: 本发明公开了一种观测融合蛋白长距离转运至水稻叶芽的方法，该方法将GFP融合蛋白处理水稻根尖后，处理过根尖的水稻植株叶芽进行冷冻切片，切片后PI荧光染料进行染色，共聚焦显微镜直接观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽。该方法利用GFP融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处，叶芽被冷冻切片后PI染色，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白从水稻根尖转运至叶芽，能直接定性地了解GFP融合蛋白在水稻植株内的长距离转运情况。GFP融合蛋白直接处理水稻根尖0.5cm处，共聚焦显微镜观测GFP融合蛋白转运至叶芽可为进一步开展效应蛋白能引起水稻系统防御反应提供非常强有力的证据。该方法简便、准确、快速。

公开(公告)号：CN103175809A

公开(公告)日：2013-06-26

申请号：CN201210554679.X

申请日：2012-12-05

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨静 ,  李成云 ,  刘林 ,  朱有勇 ,  赵婧 ,  徐畅 ,  施竹凤

IPC: G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种稻瘟病菌基因的原核表达产物处理水稻根尖诱导水稻系统防御反应的方法，利用一定浓度的融合蛋白处理水稻根尖0.5cm处24h，苯胺蓝和DAB染色后观察除去0.5cm根尖以外的根组织的其他部位的胼胝质形成及活性氧产生情况。本发明的有益效果是利用稻瘟病菌基因的原核表达产物处理水稻根尖0.5cm处，通过观察根尖0.5cm以外根组织其他部分胼胝质和活性氧产生，可明确水稻系统防御反应产生的情况，克服了直接利用病原菌接种水稻叶片观察胼胝质和活性氧产生周期长且易受到叶片组织大量自发荧光干扰等弊端，最终达到为今后鉴定病原菌效应蛋白诱导植物系统防御反应产生提供简便有效的方法的目的。

公开(公告)号：CN103160518A

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201210567931.0

申请日：2012-12-16

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨静 ,  李成云 ,  刘林 ,  朱有勇 ,  徐畅 ,  施竹凤

IPC: C12N15/31 ,  C12Q1/68 ,  G01N21/64 ,  G01N21/84 ,  G01N1/30

Abstract: 本发明公开了一种稻瘟病菌的病原基因，保持现有病原菌病原相关分子模式鉴定方法不变，包括胼胝质沉积、活性氧爆发、防御相关基因表达谱分析等方法均与常规相同，其特征是通过一系列的实验证明了该基因具有病原相关分子模式的特性，即该基因是稻瘟病菌病原相关分子模式(PAMPs)。通过一系列方法鉴定到了一个稻瘟病菌病原相关分子模式。该病原相关分子模式可为今后开发生物制剂进行有效生物防治稻瘟病提供有力参考。

公开(公告)号：CN103048302A

公开(公告)日：2013-04-17

申请号：CN201210554697.8

申请日：2012-12-05

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨静 ,  李成云 ,  刘林 ,  朱有勇 ,  徐畅 ,  施竹凤

IPC: G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种检测植物产生免疫反应的方法，保持现有原核表达产物表达纯化及胼胝质和活性氧观察方法不变，采用稻瘟病菌蛋白基因的原核表达产物，按照5.0mg/ml浓度处理水稻持有不同抗性基因的24个水稻单基因系品种及根组织和叶鞘；24小时后进行DAB染色和苯胺蓝染色，荧光显微镜直接观察胼胝质和活性氧的形成情况，通过胼胝质和活性氧的形成情况判断植物是否产生免疫反应，该方法利用纯化的效应蛋白基因的原核表达产物处理水稻根组织，通过荧光显微镜观察根组织胼胝质和活性氧产生，能直接获得水稻产生免疫反应情况，同时获得能引起多个持有不同抗性基因的水稻单基因系品种和感病品种产生免疫反应的稻瘟病菌蛋白。