公开(公告)号：CN118547112A

公开(公告)日：2024-08-27

申请号：CN202410625415.1

申请日：2024-05-20

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 邓秋慧 ,  李文贵 ,  刘丽仙 ,  张晨熙 ,  朱培英

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于病毒检测领域，提供了B型牛库布病毒实时荧光定量检测方法，包括以下步骤：确定特异性引物：针对BKV 3D基因的保守区域，采用一对特异性引物；核酸提取及反转录：用Trizol Reagent法提取总RNA，将RNA核酸反转录成cDNA，并保存于‑20℃；制备阳性标准品：用BKV的cDNA为模板，使用引物进行PCR反应及电泳检测，对PCR鉴定为阳性的克隆质粒测序，并构建出重组质粒，将测序结果正确的重组质粒作为模板；反应体系及条件的优化：反应体系为20μL体系，其对0.2～0.6μL引物浓度和57～64℃退火温度进行优化；建立标准曲线；本发明通过建立BKV实时荧光定量PCR检测方法，该方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好，为BKV感染的临床诊断及分子流行病学调查提供了技术支撑。