公开(公告)号：CN113943744A

公开(公告)日：2022-01-18

申请号：CN202111290918.0

申请日：2021-11-02

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 王玉英 ,  李枝林 ,  陈璐 ,  凌青 ,  李光宏 ,  李志敏 ,  刘丹

IPC: C12N15/60 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/62

Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体公开叶斑艺兰花RCA基因的应用及其载体构建方法，通过将叶斑艺兰花RCA转入铁皮石斛中RCA基因能够正常表达，过量表达RCA基因能够增加转基因铁皮石斛中多糖含量，所述RCA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，过量表达RCA基因能够很大程度的提高增加转基因铁皮石斛中蛋白质含量、可溶性糖含量增加，光合色素含量增加，叶绿体发育良好；而敲除原球茎则无法正常发育，没有叶绿体的存在。

公开(公告)号：CN109452161A

公开(公告)日：2019-03-12

申请号：CN201811324745.8

申请日：2018-11-08

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 王玉英 ,  李枝林 ,  杨小丹 ,  李茹 ,  凌青

IPC: A01H1/02 ,  A01H1/04

Abstract: 本发明具体涉及植物遗传育种技术领域，具体为一种高效的大花蕙兰与国兰杂交育种方法，通过CTAB法提取植物基因组DNA，采用SCAR标记引物进行PCR扩增，构建系统进化树；采用Partec CyFlow Space鉴定大花蕙兰植株倍性；根据亲缘关系和倍性亲本选配；用TTC染色法对测定国兰的花粉活力，用联苯胺—过氧化氢溶液进行大花蕙兰柱头可授性测定。结合大花蕙兰的植株倍性，选择其中的二倍体大花蕙兰品种作为母本，同时选择与二倍体大花蕙兰品种亲缘关系较近的国兰品种作为父本：杂交手段为正交杂交法。该方法降低了大花蕙兰与国兰亲本选配的盲目性，提高了育种效率。

公开(公告)号：CN113943744B

公开(公告)日：2022-07-29

申请号：CN202111290918.0

申请日：2021-11-02

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 王玉英 ,  李枝林 ,  陈璐 ,  凌青 ,  李光宏 ,  李志敏 ,  刘丹

IPC: C12N15/60 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/62

Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体公开叶斑艺兰花RCA基因的应用及其载体构建方法，通过将叶斑艺兰花RCA转入铁皮石斛中RCA基因能够正常表达，过量表达RCA基因能够增加转基因铁皮石斛中多糖含量，所述RCA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，过量表达RCA基因能够很大程度的提高增加转基因铁皮石斛中蛋白质含量、可溶性糖含量增加，光合色素含量增加，叶绿体发育良好；而敲除原球茎则无法正常发育，没有叶绿体的存在。

公开(公告)号：CN111593067A

公开(公告)日：2020-08-28

申请号：CN202010560539.8

申请日：2020-06-18

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 王玉英 ,  李枝林 ,  凌青 ,  李国昌 ,  苏俊 ,  马伟荣 ,  黄新龙 ,  刘丹 ,  李茹

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12N15/66 ,  A01H5/00 ,  A01H6/62

Abstract: 本发明公开了一种含有叶斑艺兰花类黄酮3',5'-羟化酶基因(F3'5'H)且能提高植物花青素含量的专用植物表达载体pCAMBIA1301-35S-F3'5'H。本发明是利用RACE的方法从叶斑艺兰花中克隆出F3'5'H基因，用35S启动子在铁皮石斛中过量表达，并通过类似叶盘(原球茎)转化法将其转入野生型铁皮石斛中。实验结果表明在转基因铁皮石斛中F3'5'H基因能够正常表达，转入F3'5'H基因的生长情况比对照植株，转基因植株表现为更健壮，茎秆和叶片显示紫红色的特点，过量表达F3'5'H基因能够很大程度的提高增加转基因铁皮石斛中F3'5'H酶活性，蛋白质含量、可溶性糖含量增加，花青素和类黄酮物质含量增加。表明了叶斑艺兰F3'5'H基因对铁皮石斛生长发育有促进作用，且促进了类黄酮和花青素的合成，导致植株出现紫红色显色。