公开(公告)号：CN117144022A

公开(公告)日：2023-12-01

申请号：CN202311276432.0

申请日：2023-10-01

Applicant: 中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所(国家林业和草原局世界自然遗产保护研究中心)

Inventor： 姚艳霞 ,  李承锦 ,  曲志霞 ,  王传珍 ,  林若竹 ,  王小艺

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6804 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了长林小蠹RPA‑LFD检测引物和探针以及检测方法。本发明根据长林小蠹完整的ND2基因的保守区段设计了多组检测引物和探针并从中筛选得到特异性的检测引物和探针，所述RPA‑LFD检测引物由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的上、下游引物组成，所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.5所示。本发明基于所述检测引物和探针建立了长林小蠹RPA‑LFD检测方法以及长林小蠹RPA‑LFD检测试剂盒，具有较高特异性和良好灵敏度，其检测限位浓度为4.49pg/μL，检测时长可控制在30min内，能够在野外进行现场快速、准确鉴定长林小蠹，满足长林小蠹各发育阶段的野外现场快速检测。

公开(公告)号：CN116656835A

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN202310650254.7

申请日：2023-06-02

Applicant: 中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所(国家林业和草原局世界自然遗产保护研究中心)

Inventor： 姚艳霞 ,  李承锦 ,  黄谊青 ,  林若竹 ,  淮稳霞 ,  王小艺 ,  赵文霞

IPC: C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明公开了长林小蠹SS‑COI PCR检测引物以及检测方法。本发明根据长林小蠹完整COI序列中与近缘种差异较大的部分获得了特异性引物对，其核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。在此基础上，本发明提供了长林小蠹SS‑COI PCR检测方法以及长林小蠹SS‑COI PCR检测试剂盒，特异性检测结果表明，本发明建立的检测方法具有良好的特异性，能够特异性扩增长林小蠹，对于长林小蠹的近缘种均不能扩增，适用于长林小蠹的快速精准检测；灵敏度检测结果表明，本发明提供的长林小蠹SS‑COI PCR检测方法检测灵敏度高，检测限位DNA浓度为8.7×10‑2ng/μL。

公开(公告)号：CN116497127A

公开(公告)日：2023-07-28

申请号：CN202310272097.0

申请日：2023-03-20

Applicant: 中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所(国家林业和草原局世界自然遗产保护研究中心)

Inventor： 姚艳霞 ,  李承锦 ,  孙荟荃 ,  林若竹 ,  王小艺 ,  赵文霞

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6804 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了昆虫RPA‑LFD检测引物和探针以及检测方法。本发明以苹小吉丁幼虫DNA为模板，根据苹小吉丁的ITS1基因序列设计多对RPA引物进行扩增，通过比较筛选得到扩增效率最优的苹小吉丁RPA检测引物，为避免检测结果的假阳性，对筛选出的苹小吉丁RPA检测引物的反向引物和探针中引入少量错配碱基得到特异性苹小吉丁RPA‑LFD检测引物和探针并建立了苹小吉丁RPA‑LFD检测方法，实现野外准确快速鉴定苹小吉丁的目的；特异性和灵敏性检测结果表明，碱基错配后的引物对和探针能特异性扩增苹小吉丁，对于窄吉丁A以及窄吉丁B均不能扩增，检测限为DNA浓度为10‑2ng/μL以上，具有较高的灵敏度。