公开(公告)号：CN116497127A

公开(公告)日：2023-07-28

申请号：CN202310272097.0

申请日：2023-03-20

Applicant: 中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所(国家林业和草原局世界自然遗产保护研究中心)

Inventor： 姚艳霞 ,  李承锦 ,  孙荟荃 ,  林若竹 ,  王小艺 ,  赵文霞

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6804 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了昆虫RPA‑LFD检测引物和探针以及检测方法。本发明以苹小吉丁幼虫DNA为模板，根据苹小吉丁的ITS1基因序列设计多对RPA引物进行扩增，通过比较筛选得到扩增效率最优的苹小吉丁RPA检测引物，为避免检测结果的假阳性，对筛选出的苹小吉丁RPA检测引物的反向引物和探针中引入少量错配碱基得到特异性苹小吉丁RPA‑LFD检测引物和探针并建立了苹小吉丁RPA‑LFD检测方法，实现野外准确快速鉴定苹小吉丁的目的；特异性和灵敏性检测结果表明，碱基错配后的引物对和探针能特异性扩增苹小吉丁，对于窄吉丁A以及窄吉丁B均不能扩增，检测限为DNA浓度为10‑2ng/μL以上，具有较高的灵敏度。