公开(公告)号：CN101962645A

公开(公告)日：2011-02-02

申请号：CN201010263328.4

申请日：2010-08-26

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 李庆章 ,  侯晓明 ,  林叶 ,  高学军

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C07K14/47

Abstract: 一种促进奶牛乳腺上皮细胞发育及泌乳的方法，它涉及一种促进乳腺发育及泌乳的方法。方法：一、体外培养的乳腺上皮细胞；二、设计引物，PCR扩增出Kcnma1基因的全序列，然后与pGEM-T载体进行连接，再转化大肠杆菌DH5α，得克隆载体质粒；三、pSV-β-Galactosidase Control Vector质粒和克隆载体质粒进行双酶切，连接并构建表达载体，再转染体外培养的乳腺上皮细胞，使Kcnma1基因在体外培养的乳腺上皮细胞中过量表达，即完成。本发明中Kcnma1基因在泌乳期奶牛乳腺中高表达，通过实验验证了Kcnma1基因确实是能够促进奶牛乳腺上皮细胞发育以及乳产生的重要功能基因。

公开(公告)号：CN101857852A

公开(公告)日：2010-10-13

申请号：CN201010187301.1

申请日：2010-05-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 李庆章 ,  林叶 ,  侯晓明 ,  高学军

IPC: C12N5/071

Abstract: 奶牛乳腺腺泡泌乳模型的体外构建方法，它涉及泌乳模型的体外构建方法。它解决了现有体外研究奶牛乳腺的泌乳功能时均以乳腺上皮细胞为研究载体，存在模拟体内环境真实性低的问题。方法：一、制备基质凝胶的细胞培养板；二、采用胰酶和EDTA消化原代培养的妊娠４个月的奶牛乳腺上皮细胞，离心后收集细胞；三、制备细胞悬液并稀释；四、向基质凝胶的细胞培养板中加入细胞悬液，置于培养箱中培养15日，即完成构建。本发明构建的奶牛乳腺腺泡泌乳模型的人工构建过程，是体外模拟血乳屏障的仿真过程，其三维腺泡结构能真实地模拟体内情况，与反刍动物体内的乳腺腺泡具有一致的泌乳功能与生物学特性，模拟体内环境的真实性高。

公开(公告)号：CN101654667A

公开(公告)日：2010-02-24

申请号：CN200910072961.2

申请日：2009-09-23

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 佟慧丽 ,  高学军 ,  李庆章 ,  林叶

IPC: C12N5/06 ,  G01N30/02 ,  A01N1/02

Abstract: 本发明提供一种为乳蛋白基因表达调控机制的研究及乳腺表达载体的检测提供有利条件的建立奶牛乳腺上皮细胞泌乳模型的方法。实验方法步骤如下：奶牛乳腺上皮细胞的原代培养及鉴定；HPLC法测定乳糖的分泌情况；HPLC法测定β-酪蛋白的分泌情况；细胞的冻存和复苏。本发明采用组织块法对不同时期的奶牛乳腺上皮细胞进行培养，与酶消化等其他乳腺上皮细胞原代培养的方法相比，其不影响乳腺上皮细胞的活性，且培养成本十分低廉，操作十分简便。本发明实现了正常培养的奶牛乳腺上皮细胞系的延续，从而使大量珍贵的奶牛乳腺组织材料获得了妥善有效的保存。本发明为奶牛乳腺不同发育时期泌乳机理的研究提供了重要的实验材料和技术平台。

公开(公告)号：CN201762336U

公开(公告)日：2011-03-16

申请号：CN201020209344.0

申请日：2010-05-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 李庆章 ,  林叶 ,  侯晓明

IPC: C12N5/071

Abstract: 便于乳腺腺泡体模型体外构建的试剂盒，它涉及试验中使用的试剂盒。它解决了在进行乳腺腺泡模型构建试验的过程中配制和准备试剂所带来的实验过程复杂化的问题，以及所制备出的试剂本身给实验结果带来的稳定性和可靠性不高的缺点。它外包装盒和五个试剂瓶组成，所述的五个试剂瓶分别为Growthfactor-reducedMatrigelTM试剂瓶、腺泡生长培养液试剂瓶、胰酶-EDTA溶液试剂瓶、EGTA溶液试剂瓶和Cellrecoverysolution试剂瓶，外包装盒内部设置有两个保温区，两个保温区是有垂直于盒体底面的平板进行分割形成的，Growthfactor-reducedMatrigelTM试剂瓶和胰酶-EDTA溶液试剂瓶位于一个保温区中，其他试剂瓶位于另一个保温区中。体外构建乳腺腺泡模型操作简便，可充分满足泌乳生物学与乳腺功能调控研究需求的试剂盒。

公开(公告)号：CN201809354U

公开(公告)日：2011-04-27

申请号：CN201020276308.6

申请日：2010-07-30

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 林叶 ,  李庆章 ,  侯晓明

IPC: C12M3/00 ,  C12M1/22

CPC classification number: C12M23/02 ,  C12M23/10

Abstract: 乳腺腺泡培养皿，它涉及乳腺腺泡培养装置，它解决了现有普通的细胞培养板进行乳腺腺泡的构建有培养基加入量少，底面厚度过大、增加了培养基质后厚度不利于激光共聚焦显微镜观察等缺点。它是由带有上盖1的培养基底2组成，培养基底2的底面和侧壁围成的培养腔3分为上下两部分，上部培养腔为漏斗形培养基添加区，下部培养腔为圆柱形基质区。本实用新型是一种专门用于哺乳动物乳腺腺泡构建的培养皿，其结构有利于基质的铺设，有利于培养基的添加，有利于实验结果的显微镜观察，将会为乳腺腺泡构建提供一种简便、稳定、廉价的方式。

公开(公告)号：CN201762308U

公开(公告)日：2011-03-16

申请号：CN201020209343.6

申请日：2010-05-31

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 李庆章 ,  林叶 ,  侯晓明

IPC: C12M1/00 ,  C12N5/071 ,  G01N33/53 ,  G01N21/64 ,  C12Q1/04

Abstract: 便于乳腺上皮细胞分离鉴定的试剂盒，它涉及试验中使用的试剂盒。它解决了在进行乳腺上皮细胞分离鉴定试验的过程中配制和准备试剂所带来的实验过程复杂化的问题，以及所制备出的试剂本身给实验结果带来的稳定性和可靠性不高的缺点。它由外包装盒、七个试剂瓶和铜网组成，七个试剂瓶分别为消化液试剂瓶、DMEM/F12基础培养液试剂瓶、D-Hank’s溶液试剂瓶、胰蛋白酶消化液试剂瓶，BSA试剂瓶、TBST试剂瓶和荧光标记的角蛋白18抗体试剂瓶，其中D-Hank’s溶液试剂瓶和TBST试剂瓶的顶盖为冲洗盖，其他的顶盖为密封盖；所述的七个试剂瓶和铜网位于外包装盒内。乳腺上皮细胞分离鉴定试剂盒中的试剂进行消化法快速分离获得乳腺上皮细胞，并通过进行细胞培养及纯化，并鉴定其纯度。