本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种基于滚环扩增的细胞或组织样本上多个蛋白质生物标志物同时成像或定量的检测方法。基于滚环扩增技术利用n个荧光探针与带有不同个荧光杂交通路的2n‑1个环状DNA模版滚环扩增产物进行杂交，通过多通道荧光成像实现对2n‑1个蛋白质生物标志物的定性和/或定量检测；所述方法的优势在于可以通过n个荧光探针检测2n‑1个蛋白质生物标记物，操作简单，灵敏度高，解决现有技术对核酸或蛋白的检测受到荧光光谱重叠限制，多重复路成像采用迭代染色、成像和漂白/抗体去除方法时出现抗体孵育时间延长、抗原表位丢失、组织降解和荧光团失活等问题。