本发明公开了一种苦瓜籽油中高含量共轭亚麻酸α‑桐酸的富集方法，其包括如下步骤：S1、提取苦瓜籽油；S2、将苦瓜籽油与氢氧化钾－乙醇溶液混合均匀，以得到混合体系；S3、混合体系用石油醚萃取，合并有机相，得到苦瓜籽油混合脂肪酸；S4、向尿素中加入乙醇、苦瓜籽油混合脂肪酸，得到包合体系；S5、将包合体系进行超高压处理，得到共轭亚麻酸含量为50‑72％的苦瓜籽油，其中α‑桐酸纯度达到48‑62％；以及S6、采用半制备型HPLC对苦瓜籽油中的共轭亚麻酸进行收集。本发明通过尿素包合结合高压处理、半制备型HPLC的方式对苦瓜籽油中典型共轭亚麻酸，即α‑桐酸进行富集，其可以大幅提高α‑桐酸的纯度和产物收率。