本发明公开了一种重组丙酮丁醇梭菌的构建方法以及在发酵半纤维制备丁醇中的应用，所述的重组丙酮丁醇梭菌是通过在丙酮丁醇梭菌中过表达木聚糖酶基因构建得到的。与现有技术相比，本发明具有如下优势：(1)在丙酮丁醇梭菌中过表达木聚糖酶基因，成功表达木聚糖酶，该木聚糖酶具有高度可溶性且可完全分泌至细胞外，有效的提升了丙酮丁醇梭菌降解半纤维素的能力。(2)实现以半纤维为唯一碳源发酵制备丁醇的生物过程，大幅降低了制备丁醇的成本，进一步验证了将可再生的生物质能转化为生物燃料的可行性。(3)相比于野生菌，本发明构建的重组丙酮丁醇梭菌将丁醇产量从1.25g/L提高到4.03g/L。