本发明涉及一种N‑叠氮基乙酰‑D‑甘露糖胺衍生物及其制备方法和应用。所述化合物的结构如通式(I)所示，其中，R1选自为O、S、NH、NMe、‑CH＝CH‑；R3选自为O、S、NH、NMe；R2选自为H、F、Cl、Br、I、‑OH、‑NH2、C1‑6烷基、C1‑6烷氧基、‑CO‑C1‑6烷基、‑CO‑NH‑C1‑6烷基、‑COOC1‑6烷基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基；m选自为1‑4的整数；A选自式(I)所述化合物与硝基还原酶发生催化还原反应之后可自行消除或裂解的基团；表示a键或e键。本发明还提供式(I)所示化合物的制备方法和在检测硝基还原酶中的应用。