本发明涉及一种采用液相色谱串联质谱而同时测定蜂王浆中林可霉素和大环内酯类残留量的方法，目前该方法还达不到检测成本低，检测限小于1μg/kg的目的。本发明包括标准溶液制备、蜂王浆样品处理、标准曲线制作和蜂王浆样品检测工序；蜂王浆样品处理工序中使用体积浓度为97％的乙腈氨水做为提取液，将50ml玻璃离心瓶中经减压浓缩后的残渣用磷酸盐缓冲溶液来转移，再向乙酸乙酯混合进行提取；最后将上机检测样液通过高效液相色谱仪和三重四极杆串联质谱仪测得蜂王浆中林可霉素和大环内酯类的残留量。本发明检测成本低，检测效率高，检测限达到0.2-0.9μg/kg，线性相关系数在0.9914-0.9994。